Отдел продаж

Телефоны: (3532) 25-27-22, 93-60-02, 93-50-02

E-mail: [email protected]

г.Оренбург, ул.Беляевская, д.50/1, стр.1

 

Разное

Можно ли грунтовку разбавлять водой: Можно ли разбавить грунтовку водой, если она очень густая?

Содержание

Чем разбавить акриловый грунт для стен, авто и по металлу

Грунтование поверхности перед дальнейшей покраской является обязательной операцией. Ознакомившись с материалом, читатель будет знать, зачем нужно грунтовать обрабатываемую плоскость. Также ему станет понятно, как отличаются грунтовки друг от друга и чем их можно разбавить.

Разведение акриловой грунтовки водойИсточник sdelai-lestnicu.ru

Зачем грунтуют поверхности

Грунтование применяют повсеместно. Не обойтись без него при покраске и автомобиля, и обычного пола в квартире. Его обязательно нужно применять при облицовке стен и пола плиткой. И даже когда нужно наклеить обои, поверхность сначала грунтуют.

Преимущества предварительной обработки материалов:

  • Улучшается адгезия (прилипание), и финишная отделка проходит намного качественнее.
  • Составы глубокого проникновения снижают пористость поверхности. Происходит ее укрепление.
  • Эксплуатационные сроки отделки увеличиваются.
  • Грунт способен замаскировать мелкие изъяны.
  • Поскольку срок действия состава неограничен, то поверхность на долгие годы защищается от коррозии.
  • Уменьшается расход финишного материала при покраске.
  • При добавлении в состав антисептиков, раствор проводит дезинфекцию и уничтожает вредителей, а также плесень.

Особенности выбора декоративной штукатурки для внутренней отделки в коридоре

Все грунтовки можно разделить на укрепляющие и повышающие адгезию. Но чаще всего производители выпускают универсальные составы, в которых комбинируются все возможные полезные эффекты от применения.

Чем разбавлять

Как правило, грунтовка продается в магазине уже готовой к употреблению. Ее нужно только тщательно размешать. И после этого уже можно наносить на поверхность. Но в продаже также встречаются концентрированные растворы. Вот их нужно или можно разбавлять.

Насыщенный раствор универсальной грунтовкиИсточник fastbox.su

Чтобы понять, как разводить грунтовку, необходимо изучить ее состав. Потому что разбавитель подбирается по двум критериям. Сюда входит тип грунтовки. И вид поверхности материала. Например, многие профессионалы рекомендуют вообще не разбавлять концентрат при обработке слишком пористых плоскостей.

Поэтому сначала изучают поверхность. Определяются с выбором отделочного материала. На базе этого подбирают подходящий тип грунтовки, который подготовит поверхность к принятию финишной отделки. А если нужно развести концентрат, то обращают внимание на основу грунта. Обычно он и указывает что нужно использовать в качестве разбавителя.

Декоративная штукатурка под бетон: в каких стилях уместна, особенности и 5 универсальных советов




Акриловые грунты

Как правило эти составы выпускают универсальными. Они подходят для большинства поверхностей. За исключением металлических. Поскольку не обладают антикоррозийными свойствами. Их основу составляет водная эмульсия или дисперсия. Поэтому для разведения можно воспользоваться обычной водой.

Но чтобы повысить гарантию долголетнего срока службы, жидкость из-под крана сначала нужно прокипятить. Затем остудить до комнатной температуры. Заодно она отстоится и избавиться от примесей, которые выпадут в осадок. Останется только аккуратно слить воду в другую емкость.

Алкидные грунты

Ими чаще всего обрабатывают деревянные поверхности. Реже металлические. И никогда их не наносят на бетон или кирпич. Для разведения такого грунта хорошо подходит сольвент или уйат-спирит. Но можно изучить состав на упаковке и найти упоминание, конкретно какой растворитель был использован при изготовлении продукта.

Полиуретановые и эпоксидные

Отлично подходят для всех бетонных поверхностей. Есть виды, которые способны защищать металлы от коррозии. В качестве разбавителя хорошо подходит ксилол. Но можно воспользоваться и любым универсальным растворителем. Главное, чтобы его было не больше 10 % от общего объема жидкости.

Полистирольные грунты

Являются токсичными, но отлично обрабатывают отштукатуренные и деревянные стены. Из-за ядовитости рекомендуются только для наружного применения. А выбор растворителя целиком зависит от производителя. Поскольку возможны варианты, то изготовитель сам указывает, чем можно развести продукт.

Информация о продукте с указанием разбавителяИсточник krsk.au.ru

Грунты для металла

Такие смеси состоят из очень разных компонентов. Одни убивают ржавчину, другие создают защитный слой. Поэтому способ разведения и вид растворителя необходимо искать на упаковке продукта. Единственно, что можно сказать точно, такие грунты не разбавляются водой.

Декоративная штукатурка для внутренней отделки стен: виды, особенности и варианты интерьеров

Перхлорвиниловые грунты

Подобные препараты нужны для обработки внешних стен из кирпича и бетона. Как правило, выпускаются только в готовом к работе виде. Но бывает, что вязкость раствора повышается. Тогда его можно развести органическим разбавителем. Отлично подойдет сольвент или ксилол.

Правильные пропорции

При разбавлении грунта есть нюансы. Как правило, когда делают состав для обработки поверхности пожиже, то этим ускоряют его высыхание. Главное не переборщить с количеством растворителя. Иначе можно уменьшить все нужные рабочие характеристики.

Обработка деревянных реек под дальнейшую покраскуИсточник moyafanera.ru

Поэтому для разбавления подходят все грунты, кроме составов глубокого проникновения. Специалисты не советуют понижать концентрацию рабочих элементов этой группы без необходимости. И эта же рекомендация подходит для любых случаев.

Но бывает, что вязкость состава превышает нормы и грунт не проходит через пульверизатор. Или с трудом наносится кистью. Тогда нужно обратиться к изготовителю. То есть, посмотреть на упаковке рекомендации к пропорциям. Чтобы критически не снизить рабочие параметры смеси.

Но если информация отсутствует, то мастера советуют применить общепринятый способ. Разбавитель должен не превышать 25 % от объема рабочего состава.

Чем заменить

Профессионалы не рекомендуют хранить излишки разбавленной смеси. При разведении и так снижаются ее параметры. А если она еще и долгое время постоит, то в некоторых случаях становится вообще непригодной к выполнению задачи. Поэтому лучше пройти разбавленной смесью еще раз по поверхности и использовать ее всю.

Заменитель грунтовки в экстренных случаяхИсточник spb-artstroy.ru

Но существуют ситуации, когда грунтовки может не хватить на весь задуманный участок. Неопытные строители находят два выхода из положения. Одни бегут в магазин за добавкой. Другие увеличивают объем рабочего состава, разбавив его водой.

Ни того, ни другого лучше не делать. Покупать целую упаковку, чтобы обработать маленький участок нерентабельно. А добровольно понижать качество грунтовки разбавлением – нецелесообразно. Лучше быстро приготовить немного грунта в домашних условиях.

Для замены подойдет разбавленный водой клей ПВА. Такой состав способен выполнить все функции обычной грунтовки. Укрепит поверхность и повысит ее адгезию. Также можно обработать оставшийся участок любой водно-дисперсионной краской.

Венецианская штукатурка: виды, способы отделки и уход

Заключение

В основном разводят концентраты грунтовок. Еще разбавляют составы, у которых повысилась вязкость. В остальных случаях не рекомендуется понижать положительные свойства у смесей. Тем более в целях экономии. Ведь за нее часто приходится платить повторным ремонтом. А чтобы правильно подобрать растворитель и его пропорции, нужно обратиться к производителю. Надежный изготовитель всегда указывает всю нужную информацию на упаковке своего товара.

нужно ли разводить грунтовку водой, сколько слоев стоит нанести на разные поверхности валиком, какой смеси отдать предпочтение

Зачем грунтовать поверхность перед покраской

Грунтование поверхности грунтовкой перед окрашиванием выполняет ряд функций:

  • укрепляет верхний слой материала;
  • снижает впитывающую способность;
  • улучшает сцепляемость основания и отделки;
  • уменьшает количество клея, краски, необходимых для поклейки обоев или окрашивания;
  • повышает износостойкость поверхности;
  • придает основанию антисептические свойства, убивает грибок и плесень.

Если грунтовка наносится на стены или потолок перед окрашиванием, следует в праймер ввести колер по оттенку, близкий к цвету отделки. В результате краску можно будет нанести в один слой и получить хороший результат.

В продаже есть большое количество разных по виду грунтовок. Они могут быть универсального характера и специального назначения. Среди них популярностью пользуются:

  • акриловые грунтовки – на водной основе, предназначены для обработки поверхностей из кирпича, бетона, дерева и пр. , без запаха, быстро сохнут;
  • алкидные грунтовки – созданные на базе фосфата или хромата цинка, служат для покрытия металла, стекла, керамики, долго сохнут, препятствуют развитию на металлах ржавчины;
  • минеральные грунтовки – содержат гипсовые, цементные, известковые добавки, используют для грунтования кирпичных, бетонных, оштукатуренных поверхностей;
  • кварцевые грунтовки – в составе содержат песок, который способствует улучшенной адгезии за счет создаваемой песчинками шероховатости.

Приобретая тот или иной товар, обратите внимание на то, для какой цели он предназначен – для укрепления поверхности или для улучшения ее адгезионных качеств.

Как рассчитать расход грунтовки

На упаковке изделия производитель указывает примерный расход состава в граммах на 1 метр квадратный. Например, расход алкидной грунтовки составляет 120 граммов на метр квадратный, а водно-дисперсионной глубокого проникновения – 100 граммов на метр квадратный. Фасадной грунтовки на акриловой основе потребуется 150 граммов на метр квадратный, а бетоноконтакта уйдет на такую площадь 350 граммов.

На практике расход грунтовок может меняться в большую или меньшую сторону. Это зависит от свойств обрабатываемого материала, способа нанесения, вида грунта, температуры воздуха, его влажности. Специалисты рекомендуют покупать грунтовку в объеме, который на 15% больше расчетного, указанного на упаковке. Вместе с тем опыт показывает, что покупать материал сразу на все запланированные работы не стоит. Если приобретенная грунтовка будет израсходована не вся, то остаток ее пропадет (закончится срок годности). А если грунта не хватит, его можно всегда докупить.

Грунтование перед шпатлевкой: надо ли?

Большинство людей, которые затеяли провести отделку помещения, задаются вопросом: нужно ли грунтовать стены перед шпаклевкой? Ответ на этот вопрос не всегда однозначен, но все же лучше это сделать. Грунтовка существенно улучшает сцепление материалов и обеспечивает защиту от лишней влаги.

Если поверхность заранее обработать грунтовочной смесью, то результат будет держаться существенно дольше. Разумеется, можно не проводить грунтовку, однако в этом случае не стоит рассчитывать на долговечность ремонта.

Подготовка к нанесению

В продажу грунтовка поступает в сухом и уже готовом к употреблению состоянии, которую можно наносить сразу. Также продают концентрированные растворы, которые доводят до готовности, разбавляя водой.

Готовый к употреблению продукт (например, акриловую грунтовку) размешивают, чтобы правильно распределились по составу все компоненты, а затем отливают в емкость необходимое количестве и проводят обработку.

Водно-дисперсионный грунт концентрат разводят в соотношении 1:4 (на одну часть концентрата добавляют 4 части воды). В чистую емкость отливают необходимое количество концентрата, а затем добавляют воду – таким образом получают необходимую порцию грунта для обработки определенной площади поверхности.

Двухкомпонентную грунтовку разводят в такой последовательности: сначала вводят отвердитель, а затем – разбавитель для получения нужной вязкости.

Сухой грунт разводят водой в соотношении 1:4. Алкидные грунтовочные составы разбавляют растворителем 649, 650, ксилолом, сольвентом (пропорции указаны на упаковке). Масляные грунты разводят олифой.

Важно помнить, что инструкция по разведению состава согласуется с требованиями ГОСТа, отступление от пропорций может привести к нарушению технологии работ, и основание не приобретет необходимых качеств.

Общая технология нанесения

Грунтование поверхности перед отделкой – непременное условие успешного ремонта, пропускать эту процедуру никак нельзя. Перед тем как приступить к работе, необходимо приготовить следующие инструменты: кисти, валик с телескопическим удлинителем, лоток для грунтовки. Не помешает стремянка – с нее удобно обрабатывать стены в верхней части и потолок.

Далее подготавливают поверхность: смывают побелку, удаляют старые обои, очищают от пыли, грязи, масляных пятен. Ознакомившись с инструкцией по разведению грунтовки, готовят его и, отлив небольшое количество в лоток, приступают к грунтованию. С грунтом работать можно при температуре от 5 до 30 градусов и влажности воздуха до 75%.

Поверхность промазывают тщательно, не оставляют пропусков и не делают подтеков. В местах, куда не достать валиком, работают кисточками. После обработки поверхность должна высохнуть (время высыхания грунта указано на упаковке). При необходимости наносят второй слой грунтовки.

Особенности грунтования

Хотя этот процесс нельзя назвать очень сложным, все же многие не знают, как правильно грунтовать стены. Во время подготовки основания нужно в полной степени соблюдать все правила и технологии грунтовки, которые позволяют добиться максимальной эффективности от данного процесса.

Грунтовка стен под обои производится только тогда, когда были завершены все предварительные работы и к качеству поверхности нет претензий. Перед тем, как грунтовать стены, следует провести такие работы:

  • оштукатуривание стены с применением цементно-песчаного раствора;
  • выравнивание поверхности с применением различных видов шпатлевки.

Грунтование поверхности можно проводить только после того, как стена будет полностью гладкой и сухой, иначе можно испортить все полученные во время проведения подготовительных работ результаты.

Перед нанесением грунтовки валик окунается в раствор и раскатывается по ребристой части поддона для удаления лишней жидкости. Дело в том, что по своей плотности смесь недалеко ушла от воды, поэтому излишки могут стекать по стене. В труднодоступных местах вместо валика возможно применение большой кисти.

Грунтовку можно наносить как валиком, так и кистью, причем первый вариант в чаще всего используется для грунтования основных стен, а второй — для углов, участков за трубами и батареей, а также других труднодоступных мест.

Методы нанесения грунтовок

Наносят грунт на обрабатываемую поверхность разными способами: вручную (кистью, валиком) или с использованием автоматизированных средств (пульверизатора, краскопульта). Выбор метода зависит от объема работ. Если речь идет об обработке одной-двух стен, грунтовать лучше валиком. Когда грунтовать приходится много – без краскопульта не обойтись. На упаковке с грунтовкой производитель указывает допустимые методы использования. Пользователь сам выбирает удобный и доступный ему способ обработки поверхности.

Как наносить кистью

Кисти для нанесения грунтовок применяют в тех случаях, когда необходимо обработать незначительные участки поверхности. На больших площадях инструмент не эффективен. Кисточками грунтуют, как правило, труднодоступные для валика или распылителя места.

Технология нанесения грунта на поверхность ничем не отличается от такой же работы с краской. Кисть окунают в грунт, затем прижимают к стенкам емкости, чтобы стекли излишки материала. На поверхности кистью заполняют пространство, без подтеков и пропусков. Работать нужно аккуратно, чтобы грунтовка не капала на пол, не брызгала на другие стены, окна, одежду, не попадала на открытые участки рук, в глаза.

При попадании материала в глаза их срочно промывают большим количеством воды. Если в процессе работы грунт попадет на стекла окон, то капли также срочно удаляют влажной тряпкой, иначе после высыхания на стекле останутся трудноудаляемые пятна. Кисточкой наносить грунтовку на больших площадях – трудоемкая и затратная по времени работа. Лучше ее выполнять валиком.

Как наносить валиком

Работать валиком получается намного быстрее, чем кистью. Инструмент захватывает за один проход большую площадь и наносит грунтовку на поверхность равномерно. Обработка валиком имеет свои особенности.

Для работы необходим специальный лоток, в который наливают порциями грунтовку. Валик окунают в жидкость и на ребристой части лотка прокатывают, чтобы излишки материала стекли, а сам валик равномерно пропитался. Затем переносят инструмент на поверхность и прокатывают ее участок, стараясь наносить грунт равномерно. Не допускают при этом пропусков и подтеков.

Следующую партию грунта начинают наносить рядом с предыдущей, постепенно заходят на ранее обработанный участок. Чтобы не было пропусков, в грунтовку добавляют немного колера, близкого по цвету с основным цветом отделки. Так можно контролировать процесс грунтования и избежать пропусков.

Чтобы доставать валиком до потолка и верхних частей стены, на инструмент прикрепляют телескопический удлинитель. В местах, куда валиком достать невозможно, покрывают основание кисточкой.

Работая с инструментом, следят за тем, чтобы грунтовка не капала на пол, одежду, тело, не попадала в глаза. Для защиты тела, глаз используют перчатки и очки. Пол закрывают полиэтиленовой пленкой, бумагой, картоном.

Как наносить распылителем

Самый эффективный способ грунтования больших площадей – это распыление при помощи краскопульта. Грунтовка готовится обычным способом, описанным выше. Главное – подобрать дюзу, соответствующую зернистости, вязкости и текучести материала. Для нанесения грунта используют дюзы от 1,4 до 1,8 мм и иглу по диаметру сопла.

Следующим шагом настраивают форму факела (специальным винтом) и объем наносимого грунта на распылителе. Устанавливают давление подаваемого воздуха в пределах 3–5 бар. Наносят состав на пробник и оценивают качество распыления. Подготовленную грунтовку заливают в краскораспылитель и, соблюдая меры предосторожности, наносят материал на основание. Работают краскопультом быстро, наносят грунт равномерно, не задерживаются на одном месте долго, иначе будут подтеки. После покрытия ждут высыхания грунта и приступают к дальнейшей обработке.

Необходимые инструменты

Для нанесения грунтовки на стены можно использовать два инструмента: валик или кисточку. Кисточка больше предназначена для краски, так как грунтование не требует такой тщательности. Однако, в углах и труднодоступных участках без нее не обойтись.

А вот выбор валика – дело важное. От него зависит расход материала, а также эффективность его нанесения на стену. Раствор грунтовки обладает почти той же плотностью, что и вода. Среди всех валиков вам подойдет меховой, который хорошо впитывает грунтовку и позволяет равномерно наносить ее на стену.

Поролоновый валик только разбрызгает смесь, а декоративный и вовсе предназначен для других целей.

Сколько должна сохнуть грунтовка перед покраской

На упаковке указано время, за которое грунт высыхает полностью, а также содержится информация, при каких условиях выполняют сушку (температура, влажность), можно ли использовать технические средства для ускорения процесса высыхания. При производстве ремонтных работ важно дождаться полного высыхания грунта, так как при полимеризации грунтовки поверхность приобретает те свойства, которые необходимы для дальнейшей финишной отделки. При неполном высыхании грунта отделочные материалы лягут неровно и качество сцепления с основанием будет не прочным.

Акриловые грунтовки сохнут в течение 12 часов, материал отличается универсальностью и способностью глубоко проникать в основание. На упаковке указано, что высыхает материал за несколько часов, однако, если наносят несколько слоев, правильнее будет дать больше времени на высыхание. Проверить, высохла грунтовка или нет, можно, прикоснувшись к обработанной поверхности рукой. Если состав высох, то основание не будет липким, а температура в месте обработки будет такой же, как и на необработанной части.

Грунтовки с кварцевым наполнителем сохнут быстрее (до 6 часов), хотя время зависит от количества слоев. Алкидные грунтовки высыхают примерно за 12–14 часов. Полимерные – за 24 часа, а глифталевые – 12–18 часов. Быстро сохнут шеллаковые, минеральные грунты – всего несколько часов.

К отделке приступают только после полного высыхания грунтовки.

Разведение грунтовочной смеси

Несмотря на то, что грунтовка не является наиболее дорогим строительным составляющим ремонта, для отделки одного помещения понадобится немалое ее количество. Именно поэтому нужно разводить грунт водой, однако делать следует это аккуратно и внимательно.

Количество применяемой для этого воды зависит от производителя и обычно указывается на упаковке. Общепринятой пропорцией является часть воды на две части грунтовки. Полученный в результате смешивания раствор должен быть использован в тот же день. Спустя некоторое время он испортится и потеряет свои свойства. Наносимую на штукатурку смесь лучше сильно не разбавлять, так как цементно-песчаные растворы хорошо впитывают в себя влагу.

Чем можно заменить грунтовку

Грунт можно изготовить самостоятельно. Приведем несколько рецептов составов, выполненных своими руками.

Для приготовления грунтовки глубокого проникновения, который обеспечит водонепроницаемость поверхности, подойдет строительный клей или клей ПВА. Клей разводят водой и добавляют в получившуюся смесь цемент, перемешивают и процеживают через марлю. Для проверки получившегося состава наносят часть материала на пробник. На поверхности не должна образовываться пленка. Если после высыхания появилась пленка, то в смесь добавляют воду. Цемент можно заменить мелом.

Грунт, укрепляющий стены, готовят так: берут медный купорос, столярный клей и хозяйственное мыло в пропорции: 1л купороса, 5л клея и 2 куска мыла.

Есть еще один рецепт грунтовки, состав котороой обеспечивает отличное сцепление финишной отделки с основанием, даже с металлом. Для смеси состава понадобится кусок хозяйственного мыла, 200 граммов малярного клея, 250 граммов алюмокалиевых квасцов, 2 килограмма порошка мела, 30 миллилитров чистой олифы. Вначале разводят квасцы в одном литре воды, далее подогревают 10% клея на огне, постоянно перемешивают, затем добавляют олифу и квасцы, а потом – мел. После остывания раствор готов к применению.

Силикатная грунтовка | Жидкие краски для фасадов и покрытия | Продукция


Описание продукта

Силикатная грунтовка Fescon — средство для грунтования и разведения, придания прочности минеральным основаниям и разбавления силикатной краски Fescon, применяется для внутренних и наружных работ.

 

  • Не содержит растворителей и размягчителей
  • Большая глубина проникновения
  • Очень хорошо пропускает водяной пар
  • Укрепляет, подготавливает и выравнивает поверхность
  • Без запаха, низкоэмиссионная


Область применения

  • Разбавление силикатной краски Fescon
  • Грунтование и отверждение оснований, окрашиваемых силикатной краской Fescon и другими красками для внутренних работ (см. техническую спецификацию на силикатной краску Fescon).

Vinkki! Vieritä taulukkoa sivuttain












6416841760616

Силикатная грунтовка

76061

10 л

При грунтовании с использованием силикатной грунтовки разбавить водой в соотношении 2:1. Инструменты вымыть водой сразу после использования, очистку рекомендуется проводить и в перерывах.

Основание должно быть прочным, чистым и сухим, на нем не допускается жир, воск, силикон, пыль и другие загрязнения.

Силикатная грунтовка наносится кистью или распылителем. Наилучший результат достигается при нанесении кистью. Условия сушки — температура не ниже 20 °C при относительной влажности воздуха не более 65 %. Следующая окраска выполняется примерно через 12 часов, окончательное высыхание происходит примерно через 4–5 дней. Малярные работы производятся в соответствии с инструкцией по работе с силикатной краской Fescon


Обработка отходов

Способ хранения и утилизация отходов См. отдельные инструкции по хранению и утилизации https://www.fescon.fi/ru/material-nyj-bank










Вид состояния
жидкий
Цвет
молочного цвета, после высыхания бесцветная
Размер упаковки
10 л
Хранение

беречь от мороза, не хранить при температуре выше +25°C

Плотность

Прибл. 1,05 г/см³

Минимальная температура

+8 °C

Время высыхания

Готово к покрытию не ранее чем через 12 ч.

Относительная влажность воздуха
менее 80 %
VOC-концентрация

<1 г/л (предельное значение по нормам ЕС для продукта A/h 30 г/л) (2010)


Данные получены в результате проведенных испытаний и практических наблюдений. Мы не можем повлиять на окружающие условия объекта работ, поэтому не можем взять на себя ответственность за конечные результаты, на которые влияют локальные условия.

Хорошая грунтовка-залог долговечности вашего ремонта

 Долговечность будущих декоративных покрытий и максимальное качество отделочных работ обеспечивают грунтовки. Прежде чем заняться укладкой плитки, штукатуркой стен, поклейкой обоев, нанесением краски, необходимо тщательно подготовить поверхность. Для этого и применяются грунтовки. Основной их задачей является обеспечение плотного сцепления основания с верхним слоем наносимого в дальнейшем покрытия. Назначение грунтовок — укрепление поверхностей, улучшение их адгезионных свойств, повышение водостойкости и щелочестойкости.

В нашем интернет магазине строительных материалов они представлены в достаточно широком ассортименте. Поэтому, прежде чем приобретать ту или иную марку грунтовки, необходимо понять, для какого типа поверхности и с какой целью она будет применяться.

Трио грунтовок Ceresit предназначено для подготовки к нанесению дальнейшего покрытия всех видов поверхностей. Грунтовку CT19 Бетоноконтакт лучше всего применять для обработки гладких бетонных поверхностей перед оштукатуриванием и плиточной облицовкой. Применение водно-дисперсионной грунтовки CT16 будет наиболее уместным для таких типов оснований, как известковые и цементные штукатурки, гипсовые штукатурки и шпаклевки, ДСП и гипсокартонные листы. Эта грунтовка выпускается белого цвета, но она колеруется в цвет любого покрытия. Грунтовка CT17 водно-дисперсионная. Она относится к грунтовкам глубокого проникновения и является универсальной, то есть пригодна для работы с любыми типами оснований.

Грунтовки Knauf представляют собой готовые к употреблению дисперсии на водной основе. Они не содержат растворителей. В линейке грунтовок Knauf можно подобрать именно ту, которая наиболее оптимально будет соответствовать требованиям пользователя. Knauf Isogrund хорошо подходит для обработки цементных штукатурок, причем неважно старых или новых. Knauf Putzgrund – хорошее решение для подготовки поверхности к нанесению декоративной штукатурки белого цвета. Knauf Tiefengrund быстро сохнущая грунтовка, она отлично укрепляет поверхность ослабленных оснований, на гипсовой и меловой основе.

Стирол-акрилатные грунтовки Волма изготавливают с добавлением антисептика. Это предохраняет поверхности от образования грибка, плесени и мха. Разбавлять водой эти грунтовки не нужно, они готовы к применению. Для работы со слабо впитывающими основаниями применяют грунтовку Волма-Контакт. Грунтовка Волма-Интерьер служит для обработки поверхностей внутри помещения. Волма-Аква, Волма-Пласт и Волма-Универсал подойдут и для внутренних, и для наружных работ.

В линейке грунтовок российского производителя Старатели есть грунтовка для обработки невпитывающих поверхностей Бетон-Контакт. Грунтовка «Глубокого проникновения», представляющая собой сочетание воды, стирол-акриловой дисперсии, целевых добавок и антисептика, предназначена для работ в помещениях, в которых предусмотрен режим влажной дезинфекции.

Грунтовка «Бетонконтакт» компании Русеан хорошо зарекомендовала себя при работе с любыми видами поверхностей. В состав Грунтовки глубокого применения включены специальные антисептические и противогрибковые добавки.

Ассортимент немецкого производителя Dufa довольно разнообразен. Грунтовки отличаются типом и областью применения. Акрил-гидрозольный состав Tiefgrund LF применяют перед нанесением краски. Грунт-эмаль Expert PU Vorlack D 338 используется для покрытия радиаторов отопления и труб теплосетей. Деревянные, металлические и стеклянные поверхности будет защищать универсальный аэрозоль-грунт Dufa Universal-Grundierspray. Предотвратить проникновение пятен никотина, воды, жира и копоти можно с помощью Isoliergrund. Металлические конструкции от коррозии защитит Zink-Alu-Spray. Putzgrund LF грунтовка предназначена для обработки всех типов поверхностей, как внутренних, так и наружных.

Можно ли разбавлять грунтовку водой? – Restaurantnorman.

com

Можно ли разбавлять грунтовку водой?

Для разбавления праймеров можно использовать либо ТЕ-буфер, либо воду, не содержащую нуклеаз. Однако, если праймеры должны храниться в течение длительного времени, буфер TE может быть лучшим выбором, поскольку он может помочь предотвратить деградацию.

Как разбавить раствор грунтовки?

Обычно его можно найти на самой тубе или на листе грунтовки, прилагаемом к заказу. На каждый 1 нмоль добавьте 10 мкл воды для ПЦР.Например, если в праймере указано 19,4 нмоль, добавьте 194 мкл воды для ПЦР. Смешайте раствор на вортексе, чтобы восстановить грунтовки.

Сколько воды нужно добавить в грунтовку?

Чтобы определить количество воды, которое нужно добавить к лиофилизированному праймеру, просто умножьте количество нмоль праймера в пробирке на 10. Это будет количество воды, которое нужно добавить, чтобы получить запас праймера с концентрацией 100 мкМ. Например, если имеется 38,2 нмоль праймера, 100 мкМ запаса праймера создается путем добавления 382 мкл воды.

Как приготовить рабочую концентрацию грунтовки?

Чтобы получить типичную 100 микромолярную (100X) исходную концентрацию праймеров, растворите праймеры в объеме стерильной дистиллированной воды, который в 10 раз превышает количество нмоль в пробирке, используя микролитры воды.

Как разбавлять грунтовки Sigma?

Проверка количества

  1. Ресуспендируйте олигонуклеотид в 400 мкл воды или буфера.
  2. Разведите 12 мкл в 988 мкл стерильной воды, не содержащей нуклеаз.
  3. Измерьте A260 образца объемом 1 мл в кювете.
  4. Убедитесь, что значение ОП находится в линейном диапазоне (от ~0,1 до 1 ОП).
  5. Умножьте ОП объема пробы на коэффициент разбавления.

Как разбавить 100 мм до 10 мм?

См. ниже уравнения коэффициента разбавления. Например, если исходный раствор с концентрацией 100 мМ разбавляется для получения раствора с концентрацией 10 мМ, результирующий коэффициент разбавления равен 10. Для этого конкретного разведения также можно сказать, что исходный раствор был разбавлен в 10 раз.

Сколько слоев грунтовки мне нужно?

Короче говоря, для большинства покрасочных работ обычно требуется 2 слоя грунтовки. Обильно нанесите грунтовку и дайте ей полностью высохнуть перед нанесением последнего слоя внутренней краски. Чтобы получить больше советов по рисованию для ваших следующих проектов рисования, нажмите на ссылку ниже.

Чем разбавлять грунтовку?

Добавьте небольшое количество чистой воды в грунтовку на водной основе или небольшое количество уайт-спирита в грунтовку на масляной основе. Следите за тем, сколько вы добавляете.Тщательно перемешайте и снова попробуйте распылить на доску. Продолжайте добавлять небольшое количество разбавителя в грунтовку до тех пор, пока она не начнет легко распыляться.

Установка ПЦР

— шесть важнейших компонентов, которые следует учитывать | Thermo Fisher Scientific

Успех ПЦР зависит от ряда факторов, при этом компоненты реакции играют решающую роль в амплификации. Ниже приведены ключевые моменты настройки реакций, подробно описанные на этой странице:

Рекомендуемое видео: Основы ПЦР

?

Матрица ПЦР для репликации может быть из любого источника ДНК, такого как геномная ДНК (гДНК), комплементарная ДНК (кДНК) и плазмидная ДНК.Тем не менее, состав или сложность ДНК способствует оптимальному вводу количества для ПЦР-амплификации. Например, достаточно 0,1–1 нг плазмидной ДНК, а 5–50 нг гДНК может потребоваться в качестве исходного количества для ПЦР объемом 50 мкл. Оптимальные количества матрицы также могут варьироваться в зависимости от типа используемой ДНК-полимеразы; ДНК-полимераза, спроектированная так, чтобы иметь более высокую чувствительность из-за сродства к матрице, потребует меньше вводимой ДНК. Оптимизация ввода ДНК важна, потому что более высокие количества увеличивают риск неспецифической амплификации, тогда как более низкие количества снижают выход ( Рисунок 1 ).

 

Рис. 1. Сравнение результатов ПЦР с плазмидой и матрицей гДНК человека. Та же ДНК-полимераза использовалась для амплификации целевой последовательности длиной 2 т.п.н. из различных количеств исходной ДНК в рекомендуемых условиях.

Иногда протоколы ПЦР могут требовать ввода ДНК с точки зрения количества копий, особенно для геномной ДНК. Расчет числа копий зависит от количества присутствующих молекул в молях входной ДНК. Используя константу Авогадро (L) и молярную массу, число копий можно рассчитать следующим образом:

Число копий = L x количество молей = L x (общая масса/молярная масса)

Молярная масса конкретной цепи ДНК равна определяется его размером или общим количеством оснований (т.д., сочетание его длины и одноцепочечной или двухцепочечной природы). Для удобства и простоты доступен онлайн-инструмент для расчета количества копий по массе входной ДНК.

Теоретически одной копии ДНК или одной клетки достаточно для амплификации с помощью ПЦР в идеальных условиях. Однако на практике эффективность амплификации определенного количества матрицы сильно зависит от компонентов и параметров реакции, а также от чувствительности ДНК-полимеразы.Кроме того, выбранная ДНК-полимераза должна быть сертифицирована на контролируемый низкий уровень остаточной ДНК, чтобы свести к минимуму ложные сигналы в ПЦР.

Помимо гДНК, кДНК и плазмидной ДНК также можно повторно амплифицировать продукты ПЦР для получения более высокого выхода мишени. Хотя неочищенные продукты могут быть непосредственно использованы в качестве матрицы, переносимые компоненты реакции, такие как праймеры, dNTP, соли и побочные продукты, могут неблагоприятно влиять на амплификацию. Чтобы избежать такого ингибирования, общая рекомендация состоит в том, чтобы разбавить реакционную смесь водой перед следующим циклом ПЦР.Для достижения наилучших результатов ампликоны ПЦР должны быть очищены перед повторной амплификации. С помощью оптимизированных наборов для очистки ПЦР процедура очистки ПЦР может быть выполнена всего за 5 минут.

Как настроить реакцию ПЦР

ДНК-полимеразы играют решающую роль в репликации ДНК-мишени. ДНК-полимераза Taq , возможно, является самым известным ферментом, используемым для ПЦР — ее открытие произвело революцию в ПЦР. ДНК-полимераза Taq обладает относительно высокой термостабильностью с периодом полураспада около 40 мин при 95°С [1].Он включает нуклеотиды со скоростью около 60 оснований в секунду при 70°C и может амплифицировать длину около 5 т.п.н., поэтому подходит для стандартной ПЦР без особых требований. В настоящее время разработаны ДНК-полимеразы нового поколения для значительного повышения эффективности ПЦР.

В типичной реакции объемом 50 мкл 1–2 единиц ДНК-полимеразы достаточно для амплификации ДНК-мишени. Однако при использовании сложных матриц может потребоваться корректировка количества фермента. Например, когда в образце ДНК присутствуют ингибиторы, увеличение количества ДНК-полимеразы может улучшить выход ПЦР.Однако неспецифические продукты ПЦР могут появляться при более высоких концентрациях фермента (, рис. 2, ).

Для более специализированных применений, таких как ПЦР-клонирование, длинная амплификация и ПЦР с обогащением GC, предпочтительны ДНК-полимеразы с более высокой производительностью. Эти ферменты способны генерировать продукты ПЦР с меньшей ошибкой из длинных матриц за более короткое время с лучшими выходами и более высокой устойчивостью к ингибиторам (узнайте больше о характеристиках ДНК-полимеразы).

 


Рис. 2.Повышенное количество ДНК-полимеразы может помочь с выходом ПЦР, но может продуцировать неспецифические ампликоны.
Верхняя полоса представляет желаемый ампликон ПЦР.

Праймеры для ПЦР представляют собой синтетические ДНК-олигонуклеотиды примерно из 15–30 оснований. Праймеры для ПЦР предназначены для связывания (через комплементарность последовательностей) с последовательностями, фланкирующими интересующую область в матричной ДНК. Во время ПЦР ДНК-полимераза удлиняет праймеры с их 3′-концов. Таким образом, сайты связывания праймеров должны быть уникальными в непосредственной близости от мишени с минимальной гомологией с другими последовательностями вводимой ДНК, чтобы обеспечить специфическую амплификацию намеченной мишени.

Помимо гомологии последовательностей, праймеры должны быть тщательно разработаны другими способами для обеспечения специфичности ПЦР-амплификации. Во-первых, последовательности праймеров должны иметь температуры плавления (Т 90 110 m 90 111 ) в диапазоне 55–70°C, при этом T 90 110 m 90 111 с двух праймеров различаются в пределах 5°C друг от друга. Не менее важно, чтобы праймеры были разработаны без комплементарности между праймерами (особенно на их 3′-концах), что способствует их отжигу (т.е., вторичные структуры) или прямые повторы, которые могут привести к несовершенству выравнивания с целевой областью шаблона.

Советы по разработке праймеров для ПЦР

Кроме того, содержание GC в праймере в идеале должно составлять 40–60% с равномерным распределением оснований C и G во избежание неправильного праймирования. Точно так же на 3′-концах праймеров должно присутствовать не более трех оснований G или C, чтобы свести к минимуму неспецифическое праймирование. С другой стороны, один нуклеотид C или G на 3′-конце праймера может способствовать полезному закреплению и удлинению праймера (, таблица 1, ).Для удобства и простоты доступен ряд онлайн-инструментов для биоинформатического проектирования и выбора оптимальных последовательностей праймеров с определенными параметрами.

Таблица 1. Общие рекомендации по разработке праймеров для ПЦР.
DOS DOS Neep
  • 15-30 NT Long
  • T м 55-70 ° C (в пределах 5 ° C, для двух праймеров)
  • 40-60% GC (С однородным распространением)
  • один C или G на 3 ‘End
  • вторичная структура (взаимодополняющие)
  • прямые повторы
  • более трех G или C на 3′ End

праймеры с длинными последовательностями (т. g., >50 нуклеотидов) и/или модифицированные основания часто нуждаются в очистке для удаления неполноразмерных продуктов и неконъюгированных нуклеотидов. Очистка праймеров рекомендуется для таких приложений, как клонирование и мутагенез, где целостность последовательности и длины имеет решающее значение для успеха эксперимента.

При разработке праймеров для ПЦР-клонирования нематричные последовательности, такие как сайты рестрикции, последовательности рекомбинации и сайты связывания промотора, могут быть введены в 5′-концы в виде удлинений. Эти удлиненные последовательности должны быть тщательно разработаны для минимального влияния на амплификацию ПЦР и последующие приложения (узнайте больше о клонировании ПЦР).

При постановке ПЦР в реакцию добавляют праймеры в диапазоне 0,1–1 мкМ. Для праймеров с вырожденными основаниями или праймеров, используемых в длительной ПЦР, часто благоприятны концентрации праймеров 0,3–1 мкМ. Общая рекомендация – начинать со стандартных концентраций и корректировать их по мере необходимости. Более высокие концентрации праймеров часто способствуют неправильному праймированию и неспецифической амплификации. С другой стороны, низкие концентрации праймеров могут привести к слабой амплификации или отсутствию амплификации желаемой мишени (, рис. 3, ).

Рис. 3. ПЦР-амплификация гДНК человека с различными концентрациями праймеров. В этих экспериментах был амплифицирован фрагмент размером 0,7 т.п.н. с высоким содержанием GC. Обратите внимание на накопление неспецифических продуктов и димеров праймеров при высоких концентрациях праймеров.

Дезоксинуклеозидтрифосфаты (dNTP)

dNTP состоят из четырех основных нуклеотидов — dATP, dCTP, dGTP и dTTP — в качестве строительных блоков новых цепей ДНК. Эти четыре нуклеотида обычно добавляют в реакцию ПЦР в эквимолярных количествах для оптимального включения оснований.Однако в определенных ситуациях, таких как случайный мутагенез с помощью ПЦР, несбалансированные концентрации dNTP преднамеренно добавляются, чтобы способствовать более высокой степени неправильного включения ДНК-полимеразой, не выполняющей коррекцию.

В обычных ПЦР рекомендуемая конечная концентрация каждого dNTP обычно составляет 0,2 мМ. В некоторых случаях могут помочь более высокие концентрации, особенно при наличии высоких уровней Mg 2+ , поскольку Mg 2+ связывается с dNTP и снижает их доступность для включения.Однако dNTP, превышающие оптимальные концентрации, могут ингибировать ПЦР. Для эффективного включения ДНК-полимеразой свободные dNTP должны присутствовать в реакции в концентрации не менее 0,010–0,015 мМ (их расчетная K м ) ( рис. 4 ). При использовании ДНК-полимераз без корректуры достоверность можно повысить за счет снижения концентрации dNTP (0,01–0,05 мМ), а также пропорционального уменьшения Mg 2+ .

 


Рис. 4.ПЦР-амплификация лямбда-ДНК размером 1 т.п.н. с различными концентрациями dNTP.
Конечная концентрация MgCl 2 в каждой реакции составляла 4 мМ.

В некоторых случаях dNTP могут включать специальные нуклеотиды. Примером может служить замена dTTP дезоксиуридинтрифосфатом (dUTP) в сочетании с предварительной обработкой урацил-ДНК-гликозилазой (UDG) в качестве стратегии предотвращения переноса загрязнения ПЦР [2]. UDG представляет собой фермент репарации ДНК, который расщепляет нити ДНК, содержащие урацил.Замена dTTP на dUTP приводит к образованию продуктов ПЦР, содержащих урацил. Инкубация реакционных образцов с UDG перед началом ПЦР удаляет загрязняющие остаточные ампликоны ПЦР урацилом, тем самым предотвращая ложноположительные результаты от переходящих продуктов ПЦР ( Рисунок 5 ).

Рис. 5. Обработка UDG для предотвращения контаминации остаточного ПЦР-ампликона. UDG расщепляет урациловые основания (красные столбцы), присутствующие во фрагментах ДНК. Неосновные нити ДНК склонны к деградации в условиях ПЦР и не амплифицируются в последующей ПЦР.

При использовании dUTP в ПЦР необходимо учитывать несколько предостережений. Во-первых, замена dUTP может снизить эффективность и чувствительность ПЦР. Эту проблему можно решить, используя оптимальное соотношение dTTP и dUTP, при котором каждая молекула продукта ПЦР несет достаточное количество урациловых оснований для эффективной обработки UDG без существенного влияния на эффективность ПЦР. Во-вторых, хотя ДНК-полимераза Taq включает dUTP во время синтеза ДНК, корректирующие ДНК-полимеразы, такие как Pfu , не могут переносить dUTP, если только они не были специально модифицированы для включения урацила.Это свойство связано с наличием урацил-связывающего кармана в ДНК-полимеразах на основе архей в качестве механизма репарации ДНК [3,4].

Аналогично, модифицированные dNTP, такие как аминоаллил-dUTP, флуоресцеин-12-dUTP, 5-бром-dUTP и биотин-11-dUTP, обычно используются для включения меток для последующих экспериментов. Подобно dUTP, ДНК-полимераза должна быть способна включать модифицированные dNTP для успешной ПЦР.

Ион магния (Mg 2+ ) действует как кофактор активности ДНК-полимераз, обеспечивая включение dNTP во время полимеризации. Ионы магния в активном центре фермента катализируют образование фосфодиэфирной связи между 3′-ОН праймера и фосфатной группой dNTP (, рис. 6, ). Кроме того, Mg 2+ способствует образованию комплекса между праймерами и ДНК-матрицами за счет стабилизации отрицательных зарядов на их фосфатных остовах (, рис. 8, ) [5].


Рисунок 6. Функция иона магния в активном центре ДНК-полимеразы.
Mg 2+ помогает координировать взаимодействие между 3′-ОН праймера и фосфатной группой входящего dNTP при полимеризации ДНК.

Ионы Mg 2+ обычно добавляют в смесь для ПЦР в виде раствора MgCl 2 . Однако некоторые полимеразы, такие как ДНК-полимераза Pfu , предпочитают MgSO 4 , поскольку сульфат помогает обеспечить более надежную и воспроизводимую работу при определенных обстоятельствах. Концентрация магния часто требует оптимизации, чтобы максимизировать выход ПЦР при сохранении специфичности из-за его связывания с dNTP, праймерами, матрицами ДНК и ЭДТА (если присутствует).

Типичная конечная концентрация Mg 2+ в ПЦР находится в диапазоне 1–4 мМ, при этом 0.Для оптимизации рекомендуется шаг титрования 5 мМ. Низкие концентрации Mg 2+ приводят к небольшому количеству продукта ПЦР или его отсутствию из-за пониженной активности полимеразы. С другой стороны, высокие концентрации Mg 2+ часто приводят к неспецифическим продуктам ПЦР из-за повышенной стабильности комплексов праймер-матрица, а также к увеличению ошибок репликации из-за неправильного включения dNTP (, рис. 7, ).

 


Рис. 7. ПЦР-амплификация с различными концентрациями MgCl 2 .
Верхние полосы представляют желаемый фрагмент размером 2,8 т.п.н., амплифицированный из гДНК человека.

ПЦР проводится в буфере, обеспечивающем подходящую химическую среду для активности ДНК-полимеразы. рН буфера обычно составляет от 8,0 до 9,5 и часто стабилизируется трис-HCl.

Для ДНК-полимеразы Taq общим компонентом в буфере является ион калия (K + ) из KCl, который способствует отжигу праймеров. Иногда сульфат аммония (NH 4 ) 2 SO 4 может заменить KCl в буфере.Ион аммония (NH 4 + ) оказывает дестабилизирующее действие, особенно на слабые водородные связи между несовпадающими парами оснований праймер-матрица, тем самым повышая специфичность ( Рисунок 8 ). Обратите внимание, что ДНК-полимеразы часто поставляются с буферами для ПЦР, оптимизированными для обеспечения надежной ферментативной активности; поэтому рекомендуется использовать предоставленный буфер для достижения оптимальных результатов ПЦР.

Рис. 8. Влияние буферных ионов на образование дуплекса ДНК. Ионы калия и магния (K + и Mg 2+ ) связываются с фосфатными группами (P ) на остове ДНК и стабилизируют образование дуплекса, в то время как ион аммония (NH 4 + ) может взаимодействуют с водородными связями между основаниями (N) и дестабилизируют образование дуплексов.
 

Поскольку Mg 2+ оказывает стабилизирующее действие, аналогичное K + , рекомендуемые концентрации MgCl 2 обычно ниже при использовании буфера KCl (1,5 ± 0,25 мМ), но выше при использовании (NH 4 ) 2 SO 4 буфер (2,0 ± 0,5 мМ). Из-за антагонистических эффектов NH 4 + и Mg 2+ буферы с (NH 4 ) 2 SO 4 обеспечивают более высокую специфичность праймеров в широком диапазоне концентраций Mg 2

1 Рисунок 9 ).Важно следовать рекомендациям поставщика фермента по буферу, поскольку оптимальный буфер для ПЦР зависит от используемой ДНК-полимеразы.

Рис. 9. Результаты ПЦР при различных концентрациях MgCl 2 в двух разных типах буфера, иллюстрирующие важность выбора буфера для специфичности ПЦР. Фрагмент размером 0,95 т.п.н. был амплифицирован из гДНК человека с помощью ДНК-полимеразы Taq в этих реакциях.
 

В определенных сценариях в буфер могут быть включены химические добавки или сорастворители для повышения специфичности амплификации за счет уменьшения ошибочного запуска и повышения эффективности амплификации за счет удаления вторичных структур ( Таблица 2 ).Кроме того, некоторые ДНК-полимеразы поставляются со специально разработанными энхансерами, оптимизированными для ДНК-полимеразы и буфера для ПЦР. Эти реагенты обычно используются со сложными образцами, такими как шаблоны, обогащенные ГХ. Обратите внимание, что использование химических добавок или сорастворителей может повлиять на отжиг праймеров, денатурацию матрицы, связывание Mg 2+ и активность ферментов. Кроме того, они могут мешать некоторым последующим приложениям — например, неионогенным детергентам в экспериментах с микрочипами. Следовательно, важно знать состав буфера для успешного использования ПЦР и дальнейшего использования.

Таблица 2. Распространенные добавки или сорастворители, используемые в качестве усилителей ПЦР, и их рекомендуемые конечные концентрации [6].

использованная литература

Протоколы для олигонуклеотидов | Thermo Fisher Scientific

Просмотрите избранные протоколы, которые обычно используются для спектрофотометрического количественного определения концентрации олигонуклеотида или раствора праймера; как концентрировать или осаждать олигомеры; как PAGE очистить олигонуклеотиды; или как создавать адаптеры с вашими олигонуклеотидами.

Образцы протоколов — быстрые ссылки

1. Протокол количественного определения олигонуклеотидов, спектрофотометрически:

Добавить аликвоту ресуспендированного олигонуклеотида до конечного объема 1000 мкл с водой (вода = 1000 мкл – объем добавленного олигонуклеотида). Вортекс или пипетка вверх и вниз в течение 15 секунд. Измерьте оптическую плотность этого разведения при 260 нм (A260). Используйте приведенную ниже формулу для расчета концентрации (используйте расчетную массу на OD из сертификата анализа в своих расчетах) олигонуклеотида в исходном растворе.

Концентрация в мкг/мл = A260 × Вес на OD × коэффициент разбавления*

(* коэффициент разбавления определяется как 1000/количество ресуспендированных олигонуклеотидов, добавленных для разведения, т. е. если вы добавили 50 мкл ресуспендированных олигонуклеотидов к 950 мкл воды для определения абсорбции, коэффициент разбавления будет 1000/50 = 20)


2. Как рассчитать концентрацию праймера или сколько ресуспендировать?

Пример 1: сертификат сертификата указывает, что у нас есть 24 нмоль олиго.Если мы ресуспендировали олигонуклеотиды в 1 мл: 1 мл = 0,001 л
24 нмоль/0,001 л = 24000 нмоль/л или 24000 нМ
24000 нмоль/л 1 мкмоль/1000 нмоль = 24 мкмоль/л или 24 мкмоль
Объяснение: мы конвертируем объем, в котором ресуспендировали олигонуклеотиды, в литрах. Затем общее количество олиго в нмолях делят на объем, чтобы получить концентрацию в нМ. Нмоль преобразуют в мкмоль, чтобы получить концентрацию в мкМ.

Пример 2:
изготовление 100 мкМ праймеров:
Если в сертификате указано, что мы имеем 24 нмоль олиго:
24 нмоль X 1 мкмоль/1000 нмоль = 0. 024 мкмоль
0,024 мкмоль/100 мкмоль/литр = 0,00024 л
0,00024 л X 1000 мл/л = 0,24 мл или 240 мкл
Пояснение: Переводим из нмоль в мкмоль, затем делим на желаемую концентрацию в мкмоль/л. Микромоли сокращаются, давая необходимый объем в литрах. Затем мы переводим литры в мл. Таким образом, в этом примере олиго следует суспендировать в 0,24 мл, чтобы получить раствор с концентрацией 100 мкМ.

Пример 3:
Расчет по OD. Если OD праймера составляет 0,14: 90 103 Если мкг/OD, указанная в COA, равна 36.6:
0,14 ОП/мл X 1000 мкл/10 мкл = 14 ОП/мл запаса
14 ОП/мл X 36,6 мкг/ОП = 512,4 мкг/мл
Пояснение: ОП/мл умножается на коэффициент разбавления, чтобы получить запас OD/мл. ОП преобразуется в мкг/мл путем умножения ОП/мл исходного раствора на коэффициент преобразования мкг/ОП, указанный в сертификате подлинности. мкг сокращаются, давая мкг/мл.

Пример 4:
Расчет по MW. COA определяет молекулярную массу олиго 7440,0:
7440,9 г/моль = 7440,9 мкг/мкмоль
7440. 9 мкг/мкмоль X 68,6 мкмоль/л = 510445,74 мкг/л
510445,74 мкг/л X 1 л/1000 мл = 510,4 мкг/мл
Пояснение: г/моль равнозначно мкг/мкмоль. Молекулярная масса, выраженная в мкг/мкмоль, умножается на концентрацию в мкМ, определенную в примере 3. Микромоль компенсируется, оставляя мкг/л. Литры переводятся в мл, чтобы получить концентрацию мкг/мл.


3. Осаждение олигонуклеотидов этанолом

Для большинства целей перед использованием не требуется осаждение этанолом. Однако, если желательно осаждение этанолом, следующий протокол может быть использован для олигонуклеотидов> 20 оснований в длину и количества> 0.1 ОД. Для очень небольших количеств материала следует использовать такой носитель, как тРНК.

  1. Высушите олигонуклеотид в микроцентрифужной пробирке.
  2. Повторно растворите осадок в 0,2 мл 0,3 М ацетата натрия (pH 7,0).
  3. Добавьте 0,6 мл холодного абсолютного этанола (-20°C) и поставьте на 30 минут при 4°C.
  4. Центрифуга при 10 000 g в течение 30 минут.
  5. Осторожно удалите супернатант, не нарушая осадок.
  6. Добавьте 1 мл холодного 70% (об./об.) этанола.
  7. Центрифуга при 10 000 g в течение 10 минут.
  8. Осторожно удалите супернатант (не повреждая осадок) и выпарите досуха.
  9. Хранить олигонуклеотид при -20°C.

4. Очистка олигонуклеотидов с помощью ПААГ

(выдержка из протокола из руководства Invitrogen GeneTrapper. Примечание. Плохое разрешение на готовых мини-полиакриламидных гелях с меньшими (т. е. >25 нт) олигонуклеотидами.)

  1. Используйте a гель с хорошо формирующими гребнями (не гребни типа «акульи зубы»).
  2. Приготовьте 12% акриламидный гель (19:1) с 8 М мочевиной и 1X ТВЕ.
  3. Растворите 5-10 OD олиго (приблизительно 1 OD = 33 мкг) в 25 мкл TE. К олигодобавке добавляют равный объем формамида и нагревают до 95°С в течение 1 мин. Остынь на льду. Во избежание маскировки местоположения олигонуклеотида (при обнаружении с помощью УФ-затенения) не добавляйте краситель в формамид. Мы предлагаем добавить краситель во внешнюю дорожку, не содержащую олигонуклеотидов, для целей отслеживания.
  4. Промойте лунки перед загрузкой олигонуклеотидов. Всегда оставляйте пространство между дорожками, содержащими разные олигонуклеотиды. Электрофорез 20-30 см. Для модели SA или модели S2 электрофорез ~60 Вт или 600-700 В.Для модели V16 или V15.17 электрофорез при 300 В.
  5. Поместите гель на кусок полиэтиленовой пленки, а затем на экран с усилением рентгеновского излучения (усилительной стороной вверх к гелю). Изучите гель с помощью коротковолнового УФ-света сверху (без окрашивания EtBr). Полосы олиго будут отображаться как темная тень.
  6. Вырежьте участки геля, содержащие полноразмерные олигонуклеотиды. Раздавить ломтик геля и элюировать олиго в 1 мл ТЕ в течение ночи при 37 ° C при встряхивании.
  7. Перенесите элюированный раствор в свежую пробирку с помощью пипетки на 1 мл.Промойте ломтик геля 200 мкл ТЕ и соедините с элюированным раствором. Измерьте общий объем элюированного олиго.
  8. После промывки колонки PD 10 12 мл автоклавированной воды добавьте в колонку элюированный олигонуклеотид и отфильтруйте поток.
  9. Промойте колонку автоклавированной дистиллированной водой, используя объем, равный 2,5 минус общий объем элюированного олигонуклеотида, загруженного в колонку. Откажитесь от промывочного потока.
  10. Элюируйте олигонуклеотид, добавляя в колонку 1 мл автоклавированной дистиллированной воды, и собирайте эту фракцию в стерильную пробирку.Добавьте еще 1 мл автоклавированной дистиллированной воды и соберите ее во вторую пробирку.
  11. Высушите олиго в вакууме.
  12. Растворить олигонуклеотид в 100 мкл ТЕ.
  13. Добавьте 100 мкл фенола: хлороформа: изоамилового спирта и тщательно взболтайте. Спин при комнатной температуре в течение 5 мин при 14 000 х г. Удалите 90 мкл верхнего водного слоя и перенесите его в свежую пробирку.
  14. Добавьте 45 мкл 7,5 М NH 4 OAC и 350 мкл абсолютного этанола. Перемешать на вортексе, хранить на льду в течение 10 мин и вращать в течение 10 мин при 14 000 x g при 4°C.
  15. Удалить супернатант, промыть осадок 70% EtOH.
  16. Высушите олигонуклеотид и растворите в 60 мкл ТЕ. Подтвердите с помощью OD, что концентрация олигонуклеотидов превышает 0,5 мкг/мкл.

5. Протокол производства адаптеров/Дуплекс ДНК

Перед использованием в строительных адаптерах рекомендуется очистить олигонуклеотиды в ПААГ до полной длины. В качестве альтернативы приемлемы коммерчески доступные праймеры, очищенные с помощью ПААГ, картриджа или ВЭЖХ.

Проверьте концентрацию ДНК, приготовив два разведения и определив A260.Количество олигонуклеотидов (нмоль) = A260 x нмоль на OD x коэффициент разбавления

Для приготовления адаптера сложите вместе следующие компоненты: (Вам потребуется рассчитать объемы на основе концентраций олигонуклеотидов и общего объема реакции отжига , Вы можете масштабировать реакцию в соответствии с вашими потребностями).

  • 8
  • Общие модификации
    Oligonucleotide 1 100 NMOL
    Oligonucleotide 2 100 NMOL
    10x Разжигательный буфер * 1 X обрабатываемая ДПК Вода к соответствующему объему

    Доведите раствор олигонуклеотидов до 65°, поместив пробирку в водяную баню с температурой 65°C или выше. Поддерживайте раствор олиго при температуре точно 65°C в течение 10 минут. (Очень важно поддерживать угол наклона олигонуклеотида ровно 65° в течение этого времени). Снимите раствор с водяной бани и дайте ему медленно остыть при комнатной температуре (1-2 часа).

    Храните адаптер при температуре -20°C.
    *10X Буфер для отжига:
    Смешайте следующие компоненты для получения 50 мл исходного раствора:

    Исходный Количество Конечная концентрация
    1 M Tris-HCl.5) 5 мл 100 мм 100 мм
    5 м NaCl 10 мл 1
    0,5 м ЭДТА 1 мл 10 м
    Обработанная DEPC 34 мл  

    Ресурсы

    Упростите рабочий процесс

    Инструменты для разработки праймеров

    Мастер-микс для ПЦР

    Стандартные мастер-миксы для ПЦР

    Реакционная смесь ReadyMix™ Taq для ПЦР с MgCl 2

    ReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix представляет собой готовый раствор, содержащий все необходимое для проведения ПЦР, за исключением специальных праймеров и матрицы. Смесь включает нашу высококачественную ДНК-полимеразу Taq , дезоксинуклеотиды 99% чистоты и буфер в 2-кратном оптимизированном реакционном концентрате.

    Рош Мастер ПЦР

    PCR Master от Roche содержит все реагенты, необходимые для проведения стандартной ПЦР. Все, что нужно добавить, это ДНК-матрица, праймеры и необходимое количество воды.

    REDTaq ® Реакционная смесь ReadyMix™ для ПЦР

    Эта смесь сочетает в себе эффективность и преимущества ДНК-полимеразы RED Taq ® с удобством реакционной смеси ReadyMix™ для ПЦР.RED Taq ® ReadyMix™ представляет собой готовую к использованию смесь ДНК-полимеразы Taq , дезоксинуклеотидов 99% чистоты, реакционного буфера и инертного красного красителя в 2-кратном концентрате.

    Высококачественные мастер-миксы для ПЦР

    Roche High-Fidelity PCR Master

    Выберите удобный High-Fidelity PCR Master — готовую к использованию смесь двойной концентрации, которая сочетает в себе систему ПЦР Expand High Fidelity с dNTP, MgCl 2 и оптимизированным реакционным буфером.

    Millipore KOD Мастер-микс горячего старта

    Это готовая к использованию смесь 2X, содержащая ДНК-полимеразу KOD Hot Start, два моноклональных антитела, ультрачистые дезоксинуклеотиды и реакционный буфер с MgSO 4 . Эта смесь оптимизирована для удобной высокоточной ПЦР.

    Мастер-миксы для ОТ-ПЦР

    Набор

    Roche Transcriptor High Fidelity для синтеза кДНК предназначен для обратной транскрипции РНК с повышенной точностью по сравнению с другими обратными транскриптазами. Набор содержит обратную транскриптазу Transcriptor High Fidelity, смесь рекомбинантной обратной транскриптазы и фермента, опосредующего корректуру, оптимизированную для двухэтапной ОТ-ПЦР.

    SYBR ® Green Quantitative RT-qPCR Kit обеспечивает высокочувствительный метод количественного анализа экспрессии генов. Наша QRT-PCR ReadyMix™ сочетает в себе преимущества M-MLV RT и JumpStart Taq в удобной готовой смеси.

    KiCqStart ® Реагент One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ представляет собой готовую к использованию высокочувствительную мастер-микс для количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR) матриц РНК с использованием химических реактивов для обнаружения гибридизационных зондов, таких как TaqMan ® Зонды 5′-гидролиза в системах ПЦР в реальном времени (см. раздел о совместимости приборов, чтобы выбрать соответствующий реагент для вашей машины).

    MystiCq ® Смесь для синтеза кДНК микроРНК содержит все компоненты, необходимые для превращения зрелых микроРНК в матрицы кДНК для количественной ПЦР. Этот набор имеет отдельные этапы полиаденилирования и обратной транскрипции, что позволяет при необходимости оптимизировать протокол.

    Мастер-миксы для количественной ПЦР в реальном времени

    КПЦР на основе зонда

    FastStart TaqMan® Probe Master от Roche представляет собой готовую к использованию двойную концентрированную мастер-микс, содержащую все реагенты (кроме праймеров, зонда и матрицы), необходимые для проведения количественных анализов обнаружения ДНК в реальном времени, включая qPCR и двухэтапная qRT-PCR в формате обнаружения зонда гидролиза.

    Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) — это готовая к использованию 2-кратная концентрированная мастер-микс для ПЦР, содержащая все реагенты (кроме праймеров, зондов и матрицы), необходимые для проведения количественных реакций гидролиза ПЦР в режиме реального времени. Он содержит специальный эталонный краситель ROX, что делает его пригодным для всех приборов реального времени, на которых эталонный краситель ROX необходим для количественного анализа.

    SYBR

    ® Зеленый PCR

    SYBR ® зеленые мастер-миксы подходят для ПЦР в реальном времени.Они используют асимметричный цианиновый краситель. Наша самая популярная смесь SYBR ® green — это FastStart SYBR ® Green компании Roche. FastStart SYBR ® Green Master представляет собой готовую к использованию смесь реагентов, которая упрощает подготовку реакций для количественной ПЦР и двухэтапной количественной ОТ-ПЦР с использованием интеркалирующего красителя SYBR ® Green I для обнаружения и анализа ДНК.

    KiCqStart

    ® Реагенты для количественной ПЦР ReadyMix™

    KiCqStart ® Мастер-миксы qPCR ReadyMix™ поставляются готовыми к использованию в концентрированном формате.Они включают в себя буфер, стабилизаторы и Taq с горячим стартом. Используйте их в быстрых или обычных протоколах циклирования на любом термоциклере. Выберите зеленый цвет SYBR ® или смеси на основе зонда.

    Мастер-микс KiCqStart ® SYBR ® Green qPCR ReadyMix™ совместим с системами Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett и Roche. Компоненты включают двукратный реакционный буфер, содержащий оптимизированные концентрации MgCl 2 , dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), KiCqStart ® Taq ДНК-полимераза, краситель SYBR ® Green и стабилизаторы.

    Low ROX™ работает с Low ROX™ для инструментов ABI и Stratagene.

    Реагенты LuminoCt™ для количественной ПЦР

    Основанные на высокооптимизированном химическом составе ReadyMix™, реагенты LuminoCt™ для количественной ПЦР обеспечивают непревзойденную скорость анализа без ущерба для точности, прецизионности или чувствительности. И самое главное, реагенты LuminoCt™ без проблем работают с большинством приборов для количественной ПЦР, поэтому оптимизация условий реакции сведена к абсолютному минимуму. Часто пользователи могут просто выбрать свой набор, построить анализ и начать.Создание наилучших данных qPCR никогда не было быстрее и проще.

    Реагент LuminoCt™ SYBR ® Green qPCR ReadyMix™ обеспечивает непревзойденную скорость анализа без ущерба для точности, прецизионности или чувствительности. Обширный дизайн и валидация химического состава ReadyMix™ практически устранили необходимость оптимизации при использовании реагента LuminoCt™ в сочетании с правильно разработанными праймерами. Включение антитела JumpStart™ Taq в реагент ReadyMix™ устраняет активность полимеразы при температуре окружающей среды, не вызывая проблем с производительностью, связанных с химически модифицированным Taq горячего старта.

    Набор LuminoCt™ qPCR ReadyMix™ предназначен для проведения анализов КПЦР на основе зондов на общедоступных платформах инструментов реального времени. Реагент ReadyMix™ требует добавления эталонного красителя (входит в комплект) при использовании на приборах реального времени, которым требуется пассивный эталонный краситель ROX для нормализации анализов количественной ПЦР.

    Рекомендуемые продукты Master Mix

    Adhesive Primer – обзор

    i Типы

    Типичное каменноугольное эмалевое покрытие состоит из жидких грунтовок (адгезивов), каменноугольных эмалей, внутренней и внешней оберток и финишных покрытий (крафт-бумага, побелка и/или водоэмульсионная латексная краска).

    Жидкие грунтовки (клеи) создают связь между металлом и каменноугольной эмалью. Они наносятся кистью или распылением. Клеи получают путем растворения каменноугольного пека, масел каменноугольной смолы, хлорированного каучука и синтетического пластификатора в подходящем растворителе.

    Эмали из каменноугольной смолы получают путем растворения переработанного каменноугольного пека и инертного минерального наполнителя в растворителе (обычно углеводородном масле). Производится в трех основных категориях: непластифицированная или обычная эмаль, полупластифицированная и полностью пластифицированная. 6 Обычная эмаль – твердый продукт. Он обладает более высокой устойчивостью к влаге, нефтяным маслам и нагрузкам на почву, но имеет самый узкий температурный диапазон эксплуатации и наименьшую гибкость. Полу- и полностью пластифицированные покрытия получают путем добавления в каменноугольный пек небольшого количества специального угля. Полупластифицированная эмаль имеет более широкий диапазон рабочих температур (от -18 до 60 °C (от 0 до 140 °F)), чем обычная марка, и несколько более гибкая. Полностью пластифицированная эмаль выпускается различных марок для различных условий эксплуатации.Они особенно подходят для применения в трубопроводах.

    Внутренняя оболочка представляет собой тонкий, гибкий, однородный мат, состоящий из пористых стеклянных волокон, связанных друг с другом смолой. Он может быть армированным или неармированным. Он совместим с эмалевым покрытием из каменноугольной смолы, а его текстура позволяет ему полностью проникать в материал покрытия.

    Существует три типа внешней обертки: нетканое стекловолокно, тканое стекловолокно и многослойное стекловолокно. Они равномерно пропитаны каменноугольной эмалью и пористы, так что каменноугольная эмаль просачивается сквозь них и вплавляется в финишные покрытия.

    Отделочное покрытие может состоять из одного или нескольких слоев крафт-бумаги, побелки и/или латексной краски. Крафт-бумага представляет собой гладкий и водоотталкивающий материал, наклеенный на внешнюю обертку. Тип крафт-бумаги, название аппликатора и название производителя стали обычно печатаются на ней. Побелка состоит из льняного масла, негашеной извести и солей, растворенных в воде, и наносится поверх внешней оболочки. Латексная краска состоит из синтетических материалов и пигментов в воде. После нанесения синтетические материалы сливаются и высыхают, образуя водостойкий слой белого цвета, который прилипает к внешней обертке.

    Некоторые эмалевые покрытия из каменноугольной смолы также могут наноситься при комнатной температуре (холодное нанесение). Покрытия холодного нанесения обычно используются на конструкциях, подвергающихся воздействию умеренно агрессивных сред, а не на подземной инфраструктуре. 7

    Страница не найдена — PacBio

    Соглашение об использовании изображения

    Загружая, копируя или каким-либо образом используя изображения, расположенные на этом веб-сайте («Сайт»), вы подтверждаете, что прочитали, поняли и согласны с условиями настоящего Соглашения об использовании изображений, а также с условиями, изложенными на на веб-странице с юридическими уведомлениями, которые в совокупности регулируют использование вами изображений, как указано ниже. Если вы не согласны с такими условиями, не загружайте, не копируйте и не используйте изображения каким-либо образом, если у вас нет письменного разрешения, подписанного уполномоченным представителем Pacific Biosciences.

    В соответствии с условиями настоящего Соглашения и условиями, представленными на веб-странице с юридическими уведомлениями (в той мере, в какой они не противоречат условиям настоящего Соглашения), вы можете использовать изображения на Сайте исключительно для (а) редакционного использования в прессе и/или отраслевых аналитиков, (b) в связи с обычной рецензируемой научной публикацией, книгой или презентацией и т.п.Вы не можете изменять или модифицировать любое изображение, полностью или частично, по любой причине. Вы не имеете права использовать какое-либо изображение таким образом, который искажает связанный с ним продукт, услугу или технологию Pacific Biosciences или любые связанные с ними характеристики, данные или свойства. Вы также не имеете права использовать какое-либо изображение таким образом, который означает какое-либо заявление или гарантию (прямую, подразумеваемую или предусмотренную законом) от Pacific Biosciences в отношении продукта, услуги или технологии. Права, предоставленные настоящим Соглашением, являются вашими личными и не могут быть переданы вами другому лицу.

    Вы, а не Pacific Biosciences, несете ответственность за использование изображений. Вы признаете и соглашаетесь с тем, что любое неправильное использование изображений или нарушение настоящего Соглашения нанесет компании Pacific Biosciences непоправимый ущерб. Pacific Biosciences является либо владельцем, либо лицензиатом изображения, а не агентом владельца. Вы соглашаетесь предоставить Pacific Biosciences кредитную линию следующим образом: «Предоставлено Pacific Biosciences of California, Inc., Менло-Парк, Калифорния, США», а также включить любые другие кредиты или подтверждения, отмеченные Pacific Biosciences.Вы должны включать любые уведомления об авторских правах, изначально включенные в изображения, на всех копиях.

    ИЗОБРАЖЕНИЯ ПРЕДОСТАВЛЕНЫ Pacific Biosciences НА ОСНОВЕ «КАК ЕСТЬ». Pacific Biosciences ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ ВСЕХ ЗАЯВЛЕНИЙ И ГАРАНТИЙ, ЯВНЫХ, ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ ИЛИ ЗАКОННЫХ, ВКЛЮЧАЯ, ПОМИМО ПРОЧЕГО, НЕНАРУШЕНИЕ ПРАВ СОБСТВЕННОСТИ, КОММЕРЧЕСКУЮ ПРИГОДНОСТЬ И ПРИГОДНОСТЬ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЦЕЛИ. НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ Pacific Biosciences НЕ НЕСЕТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА ЛЮБЫЕ ПРЯМЫЕ, КОСВЕННЫЕ, СЛУЧАЙНЫЕ, ШТРАФНЫЕ ИЛИ КОСВЕННЫЕ УБЫТКИ ЛЮБОГО РОДА В ОТНОШЕНИИ ИЗОБРАЖЕНИЙ.

    Вы соглашаетесь с тем, что Pacific Biosciences может прекратить ваш доступ к изображениям, размещенным на веб-сайте PacificBiosciences.com, и их использование в любое время и без предварительного уведомления, если она сочтет, что вы нарушили какие-либо условия настоящего Соглашения об использовании изображений. Вы соглашаетесь возмещать ущерб, защищать и ограждать Pacific Biosciences, ее должностных лиц, директоров, сотрудников, агентов, лицензиаров, поставщиков и любых сторонних поставщиков информации на Сайте от любых убытков, расходов, убытков и издержек, включая разумные гонорары адвокатов. , в результате любого нарушения вами условий настоящего Соглашения об использовании изображений или прекращения компанией Pacific Biosciences вашего доступа к Сайту или его использования.Прекращение действия не повлияет на права или ваши обязательства Pacific Biosciences, возникшие до прекращения действия.

    Представление образцов для секвенирования по Сэнгеру | Центр количественных наук о жизни

    Для стандартных образцов поставьте на основные объекты смесь, содержащую 12 пикомолей праймера и матрицы в концентрации, указанной ниже, в конечном объеме 12 мкл в воде. При использовании одного из десяти поставляемых праймеров добавьте указанное количество шаблона в 6 мкл воды.Это в два раза больше шаблона и праймера, которые нам действительно нужны, чтобы мы могли повторно запускать образцы, если возникнут какие-либо проблемы. Мы можем отклонить образцы, если они поставляются иначе. Дополнительная информация о концентрациях праймеров ниже*

    НЕ ПРЕДПОЛАГАЕМ, ЧТО МЫ БУДЕМ РАЗБАВЛЯТЬ ВАШИ ОБРАЗЦЫ ДО НУЖНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ.
    Мы проверим все, что вы предоставите, и будем считать, что вы правильно разбавили.

    Концентрация двухцепочечной матрицы (в воде) для снабжения Core Labs:

    Продукт ПЦР Вектор + вставка
    Длина

     Все ДНК в
    Final Volume

    Длина Всего ДНК в
    Final Volume
    500 бп 25 нг 3 кб — 5 кб 400 нг
    800 п. н. 50 нг 6 кб — 9 кб 600 нг
    1000 п.н. 125 нг 10 кб — 15 кб 1 мкг
    2000 п.н. 250 нг >15 кб 1.2 мкг
    3000 пн 350 нг

    *Пожалуйста, проконсультируйтесь с персоналом основных объектов о количестве матрицы и праймера, которые следует использовать для BAC, YAC, PAC, космид, бактериальной геномной ДНК или препаратов M13.

    *Для вырожденных праймеров добавляйте 12 пикомолей праймера на каждую вырожденность, но не более 100 пикомолей.

    Полезные советы по основам

    • Праймеры должны иметь длину не менее 18 оснований.
    • Избегайте запусков идентичных нуклеотидов, особенно гуанина.
    • Должно быть 30-80% GC.
    • Наша температура отжига составляет 50°C.
    • Избегайте праймеров, которые имеют вторичную структуру или образуют димеры.

    Как развести грунтовки

    Если у вас есть праймер в растворе с концентрацией 100 мкмоль, это то же самое, что 100 нмоль/мл или 100 пмоль/мкл. Нам нужно только 12 пикомолей в одной реакции секвенирования, поэтому разбавьте следующим методом:

    1. Сделайте разведение 1:10, возьмите 10 мкл 100 мкМ раствора, добавьте 90 мкл воды.Это даст вам раствор с концентрацией 10 пмоль/мкл.
    2. Добавьте 1,2 мкл праймера в смесь для секвенирования, которую вы поставляете в центральные подразделения, чтобы получить 12 пикомолей.

    Основные средства грунтовки

    Мы поставляем следующие грунтовки:

    Передняя грунтовка (M13F) 5′ — TGT AAA ACG ACG GCC AGT — 3′
    -95 Передняя грунтовка 5′ — GCG GGC CTC TTC GCT ATT AC — 3′
    Обратный грунт (M13R) 5′ — CAG GAA ACA GCT ATG ACC — 3′
    Грунтовка SP6 5′ — ATT TAG GTG ACA CTA TAG — 3′
    Промоутер T7 Праймер 5′ — TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG — 3′
    Грунтовка T7 Terminator 5′ — GCT AGT TAT TGC TCA GCG G — 3′
    Грунт T3 5′ — ATT AAC CCT CAC TAA AGG GA — 3′
    Poly-T A-анкерный грунт 5′ — ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТА — 3′
    Праймер Poly-T с C-фиксацией 5′ — ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТС — 3′
    Грунтовка Poly-T с G-фиксацией 5′ — ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТТТ ТГ — 3′
     

    Время оборота

    Наше время выполнения обычно составляет 2 дня для «стандартных» заказов.

    Заказам «Премиум» гарантируется выполнение в течение одного рабочего дня, если и заказ, и образцы отправляются для обработки к 8:00 утра на основном объекте. Оставьте образцы в основных помещениях, которые расположены в здании сельского хозяйства и наук о жизни, комната 3012, Университет штата Орегон. Образцы помещаются в ящики «Задачи»  в морозильной камере, и необходимо отправить веб-форму.

    Мы открыты для самовывоза с 8:00 до 17:00. Сдача образцов осуществляется в здании 3012 для сельскохозяйственных и медико-биологических наук (ALS).

    Вопросы следует адресовать Кэти Картер. Позвоните (541) 737-3413 для получения дополнительной информации.

    .